Precauções ao usar a máquina PCR

Quando Máquinas PCR detectar fatores de microinfecção, eles estão sujeitos a vários problemas devido à contaminação.Portanto, ao operar máquinas de PCR, os operadores devem seguir rigorosamente alguns procedimentos operacionais para minimizar possíveis contaminações de PCR ou eliminar a ocorrência de contaminação e outros problemas.A seguir será descrito o uso de máquinas de PCR e precauções.

Aqui está a lista de conteúdo:

lInstruções para operação da máquina PCR.

l Notas sobre a utilização de máquinas PCR.

l Métodos de cuidado e manutenção de instrumentos de PCR.

Instruções para operação da máquina PCR.

1. Primers: determinam a especificidade de Máquina PCR amplificação.Diferentes primers são usados ​​dependendo do teste de DNA, e cada microrganismo patogênico possui seus próprios primers específicos.

2. DNA polimerase resistente ao calor: Esta enzima é isolada de bactérias resistentes ao calor e pode suportar altas temperaturas de 90°C-100°C.

3. Tampão de máquina 10×PCR: 500mmol/l KCl;100mmol/L Tris-HCl (pH8,4,20℃) 150mmol/L MgCl2,1mg/ml gelatina.O tampão 10×PCR foi adquirido junto com a enzima.

Solução estoque de máquina de PCR dNTP 4,5 mmol / L: Combine 100 mg de cada um dos sais de sódio dATP, dCTP, dGTP e dTTP, adicione água deionizada esterilizada para dissolver, ajuste o pH para neutro com NaOH, dispense 300 μl de cada e armazene a -20 ℃ .A concentração de dNTP é determinada pelo método de absorção UV.As soluções dNTP disponíveis atualmente são produtos comercializados.

5. Modelo de DNA: A amostra a ser testada é tratada com uma solução de tratamento.Diferentes tratamentos e operações variam, mas o objetivo é expor o DNA que está sendo testado na amostra da máquina de PCR.

Notas sobre o uso de máquinas PCR.

1. A máquina PCR deve ser colocada em uma plataforma horizontal e robusta com uma tensão correspondente ao sistema de alimentação externo e é necessário um bom fio de aterramento.

2. A temperatura ambiente é mantida em cerca de 23°C e a umidade é mantida em cerca de 60%.

3. A máquina PCR deve ser equipada com um regulador de tensão de potência ≥ 3000W.

4. Deve ser limpo e mantido regularmente.

5. Ao usar a máquina PCR, as etapas de uso acima devem ser rigorosamente observadas.

Métodos de cuidado e manutenção de instrumentos de PCR.

1. Limpeza da cuvete primeiro abra a tampa da a máquina PCR, em seguida, mergulhe a cubeta com etanol 95% ou solução de limpeza 10% por 5 min e depois limpe os poços contaminados;aspire o líquido com uma micropipeta e use um cotonete para absorver o líquido restante;ligue a máquina de PCR, configure o programa de PCR para manter a temperatura em 50°C e faça-a funcionar, e deixe o líquido residual evaporar e remover.Normalmente, 5 a 10 minutos são suficientes.

2. Limpeza de tampa a quente para máquina de PCR quantitativo fluorescente, quando há contaminação fluorescente, e essa contaminação não é da cubeta, ou quando há contaminação ou resíduo afeta a tampa quente da máquina de PCR solta, é necessário usar ar comprimido ou água pura para limpar a parte inferior da tampa da almofada, para garantir que o orifício da cubeta esteja limpo, sem sujeira bloqueando o caminho óptico.

3. Limpar a superfície externa do instrumento PCR limpar a superfície externa do instrumento pode remover poeira e graxa, mas não até o efeito da desinfecção.Escolha um agente de limpeza não corrosivo para limpar a superfície externa da máquina PCR.

4. Substitua o fusível primeiro desligue a máquina PCR, desconecte-a, abra a caixa de fusíveis próxima ao conector de alimentação, substitua-a por um fusível sobressalente e observe se ela volta ao normal.

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